一、γ-干扰素对肝癌细胞株Hep-G2 Fas、Bcl-2表达的影响（论文文献综述）
刘皎皎[1]（2021）在《“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究》文中研究表明目的:采用随机对照临床试验（RCT）方法观察“补肾生髓成肝”法治疗晚期肝癌的临床疗效,并探究其改善肝癌肝再生微环境的疗效机制,为临床推广应用提供较高级别的循证医学证据。方法:1.采用随机分组法将2017年1月至2020年6月就诊于陕西省中医医院肝病科的入选晚期肝癌患者共126例,基于随机数字表法简单随机分成3组,即西医对照组42例（以下简称西医组）,采用西医综合治疗方案;补肾生髓成肝单独治疗组42例（以下简称中医组）,采用地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减治疗方案;补肾生髓成肝综合治疗组42例（以下简称中西医组）,采用西医治疗组方案基础上加上地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减。入选后有10例患者脱落（中医组6例,3例因失访脱落,3例因不能坚持治疗脱落;西医组4例,2例因异地就医不便退出,2例因不能坚持治疗脱落）,最终纳入统计分析病例资料的共116例,西医对照组（西医组）38例、补肾生髓成肝综合治疗组（中西医组）42组、补肾生髓成肝单独治疗组（中医组）36例。该研究通过湖北省中医院伦理审查,在中国临床试验注册中心（世界卫生组织国际临床试验平台一级注册机构）完成临床试验注册,注册号:Chi CTR-IOR-17011439。参与研究的患者均自愿签署了知情同意书。对比三组治疗3个月及治疗6个月的生存率及生存期,对比治疗前、治疗后3个月血常规、粪常规加潜血、肝功、血糖、血脂、肾功等指标,对比三组治疗前后的中医证候评分、生存质量评分,并对患者生存期的独立影响因素进行分析。2.依据治疗方案治疗3个月后分别收集中医组、西医组、中西组每组20名患者血清,共60份,正常人群血清18份。收集的血清-80℃冻存于陕西省中医医院肝病实验室。通过悬液芯片系统检测患者血清肝再生相关细胞因子粒细胞集落刺激因子（Granulocyte Colony Factor,G-CSF）、肝细胞生长因子（Hepatocyte Growth Factor,HGF）、干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）、白介素-6/8/18（Interleukin-6,IL-6,Interleukin-8,IL-8,Interleukin-18,IL-18）、血小板源性生长因子（Platelet Derived Growth Factor,PDGF-BB）、干细胞因子（Stem Cell Factor,SCF）、肿瘤坏死因子-α（Tumor Nnecrosis Factor-α,TNF-α）的含量,观察体现“补肾生髓成肝”的中药对这些细胞因子的影响。结果:（1）三组患者治疗前后生存率及生存期比较:治疗3个月及6个月后,中西医组、中医组和西医组生存率比较,有统计学差异（88.10%VS72.22%VS52.63%）、（71.43%VS58.33%VS34.21%）（P<0.05）。治疗后中西医组、中西组和西医组患者生存期比较,具有统计学差异（23.86±17.55VS20.08±19.86VS15.95±16.44）（P<0.05）。（2）三组患者治疗前后肿瘤大小比较:中西医组、中医组和西医组组间比较及前后测量时间比较,差异不具有统计学意义（P>0.05）。（3）三组患者治疗前后肝功指标比较:中西医组患者治疗后直接胆红素水平、间接胆红素水平、谷丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平较治疗前显着降低（P<0.05）,组间比较无统计学差异（P>0.05）。中医组治疗后胆碱酯酶水平较治疗前显着升高,组间比较不具有统计学意义（P>0.05）。三组患者治疗前后白蛋白水平比较,具有统计学意义（P<0.05）;两两比较,中西医组及中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（4）三组患者治疗前后其他生化指标比较:三组患者治疗后血常规指标中白细胞水平、中性粒细胞/淋巴细胞比值、血小板水平,中西医组、中医组与西医组比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后肌酐水平比较,中西医组、中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（5）三组患者治疗前后中医证候评分比较:三组患者治疗前后中医证候评分以时间因素为源的主体内差异及以组别为源的主体间效应,具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后的中医证候评分均显着低于治疗前,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组显着低于西医组的中医证候评分,差异具有统计学意义（P<0.05）。（6）三组患者治疗前后生存量表积分比较:三组患者生理机能积分方面治疗后积分均显着高于治疗前,具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组与西医组的社会功能评分比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。三组患者在生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,有统计学意义（P<0.05）,且两两组间比较后中西医组与中医组、西医组的生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。（7）HGF表达水平比较:西医组明显高于中西医组、中医组及正常人群组,差异具有统计学意（2255.17VS1097.76VS1072.39VS882.67）（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制HGF的过度表达。（8）IL-6表达水平比较:中医组、中西医组及西医组均低于正常人群组,且组间差异具有统计学意义（5638.03VS5166.45VS12842.5VS24559.34）（P<0.05）。中西医组、中医组IL-6表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制IL-6的过度表达。（9）IL-18表达水平比较:西医组、中西医组及中医组,比较差异不具有统计学意义（120.345VS82.61VS78.58）（P>0.05）,但均较正常人群组升高（75.165）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗同样可以促进IL-18的表达。（10）PDGF-BB表达水平比较:中医组相对中西医组、西医组降低,差异不具有统计学意义（4677.18VS6140.6VS5534.885）（P>0.05）。但中医组低于西医组及中西医组,且更接近正常人群组（4401.67）。提示单用“补肾生髓成肝”可以抑制PDGF-BB的过度表达。（11）TNF-α表达水平比较:西医组、中西医组、中医组及正常人群组比较差异具有统计学意义（735.955VS244.93VS573.46VS1037.25）（P>0.05）。中西医组TNF-α表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”可以更好的抑制TNF-α的过度表达。结论:“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌能够显着提高晚期肝癌患者3个月及6个月的生存率及生存期,改善晚期肝癌患者临床症状同时,改善患者各种生化指标。明显降低晚期肝癌患者的中医证候评分,提高患者的生存质量,为临床推广应用提供了较高级别的循证医学证据。“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌患者的疗效机制之一可能是通过抑制晚期肝癌患者HGF、PDGF-BB、TNF-α、IL-6的过度表达,同时升高晚期肝癌患者IL-18的表达,改善肝癌的肝再生微环境及其相关的炎症微环境、免疫微环境、血管新生微环境等。
魏敏[2]（2021）在《阿克替苷通过p38MAPK信号通路对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用》文中研究指明目的通过构建H22肝癌荷瘤小鼠模型,研究阿克替苷对肝癌小鼠皮下移植瘤的抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法1.构建H22肝癌荷瘤小鼠模型,随机分为5组:空白对照组（生理盐水0.2ml）、阿克替苷低、中、高剂量组（40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg）和阳性对照组（顺铂2mg/kg）,所有小鼠均采用腹腔注射方式给药,每周连续给药5天,共用药2周。2.给药期间动态观察并记录各组肝癌小鼠精神状态、自主活动、进食、饮水及毛发变化等一般状况,同时测量各组肝癌小鼠体质量和肿瘤体积,计算给药前后体质量变化及相对肿瘤增殖率。3.末次给药24h后处死各组肝癌小鼠,解剖瘤块,称重并计算瘤重抑制率。4.通过HE染色法,观察各组荷瘤小鼠肝癌组织的病理形态学改变。5.通过免疫组化法和RT-PCR法检测各组荷瘤小鼠肝癌组织中p38 MAPK、p-p38 MAPK、p53、c-Myc蛋白和m RNA的表达水平。结果1.一般状况比较:阿克替苷组和顺铂组肝癌小鼠优于生理盐水组。2.体质量变化比较:结束给药后,各组肝癌小鼠的体质量均较给药前增加。其中,尤以生理盐水组肝癌小鼠体质量增加最多,为（5.00±1.05）g,与中、高剂量阿克替苷组和顺铂组相比,差异显着（P<0.05）。3.瘤重抑制率比较:顺铂组抑瘤率最高:57.46%,其次为高、中剂量阿克替苷组,分别为:56.84%、47.06%,三者抑瘤率均>30%,并经统计学处理后,与生理盐水组存在显着差异（P<0.05）。4.肿瘤生长曲线比较:随着阿克替苷给药剂量增加,H22肝癌小鼠皮下瘤体积增长逐渐减缓,当阿克替苷剂量为160mg/kg时,肿瘤抑制作用最明显。5.末次给药后相对肿瘤增殖率T/C（%）比较:低、中、高剂量阿克替苷组和顺铂组依次为:68.31%、31.93%、29.68%、27.97%,其中低剂量组T/C（%）>40%,肿瘤抑制作用无效。其余3组肝癌小鼠T/C（%）均<40%,并经统计学处理后,与生理盐水组存在显着差异（P<0.05）。6.病理形态学比较:生理盐水组肿瘤细胞分裂旺盛,大小不一,紧密排列,胞核深染且显着增大,胞核呈各种畸形改变,此外,还可于镜下见到病理性核分裂像等恶性肿瘤征象。其余用药组肿瘤细胞形态与生理盐水组大体一致,但可见肿瘤细胞密度逐渐降低,且坏死数量增多,尤以顺铂组明显,部分视野下可见大片肿瘤细胞坏死。7.免疫组化半定量评分比较:与生理盐水组相比,阿克替苷可呈剂量依赖方式增加p38 MAPK、p-p38MAPK和p53蛋白在肝癌组织中的H-SCORE,同时降低c-Myc蛋白的H-SCORE（P<0.05）,其中以高剂量组最为显着（P<0.01）,且与顺铂组相比,无明显差异（P>0.05）。8.RT-PCR定量结果比较:与生理盐水组相比,阿克替苷可呈剂量依赖方式增加p38 MAPK、p53 m RNA在肝癌组织中的表达,同时降低c-Myc m RNA的表达（P<0.05）,其中尤以高剂量组最为明显（P<0.01）,且与顺铂组相比,无明显差异（P>0.05）。结论1.阿克替苷可抑制H22肝癌荷瘤小鼠皮下移植瘤的生长。2.阿克替苷可通过上调H22荷瘤小鼠肝癌组织中p53表达,降低c-Myc表达而发挥抑瘤作用,其具体分子机制可能与阿克替苷介导的p38 MAPK信号通路活化相关。
夏弋钦,修丽梅,郭利华[3]（2021）在《中药单体及复方对肝癌细胞中NF-κB相关信号通路的作用机制》文中进行了进一步梳理梳理近10年中药单体和复方对肝癌细胞中NF-κB相关信号通路作用机制的研究报道,指出目前无论中药单体以及复方对肝癌NF-κB相关通路作用机制的研究均只针对癌株细胞,对于实体移植瘤或人体内的癌组织中的癌旁组织研究甚少,实验证据并不充分,难以解释NF-κB通路在癌旁组织中激活的矛盾性;中药针对肝癌炎-癌转化过程的作用机制也尚未阐明。
张博川[4]（2020）在《桦褐孔菌多糖抑制乳腺癌的免疫浸润的机制的研究》文中提出桦褐孔菌是一种在欧洲,特别是俄罗斯广泛使用的一种药食同源大型真菌,其有广泛的药用活性。经过长期的民间摸索,桦褐孔菌多糖被证实对常见的慢性疾病,如糖尿病,心脏病等有较好的疗效,特别是针对癌症,其对肝癌、肺癌、大肠癌等一系列癌症有着广泛的抗癌活性。然而,针对其抗癌活性多围绕体外开展,对于体内及分子层面的作用机制研究不足。世界范围内,乳腺癌的发病率逐年攀升,每年全球约有200万名女性被诊断为乳腺癌,其中60多万名患者死亡;相比于其他癌症,乳腺癌在女性恶性肿瘤类型中的发病率/死亡率最高。随乳腺癌相关分子机制研究的不断积累,靶向治疗逐渐成为治疗的关键手段。考虑到乳腺癌发生和预后的过程中,免疫应答是最重要的发起路径之一,因此,通过对肿瘤免疫应答的调节,增强其反应强度,可有效地缓解乳腺癌患者的临床症候。在肿瘤免疫的微环境研究中,针对一些相对稳健的细胞浸润模式的研究,会显着影响到肿瘤的诊断、生存结局方面的评估。此类基于组学数据和高通量数据分析的研究一般被称为免疫浸润相关的研究,可以把从关键基因到细胞水平以及到临床样本生存信息层面的信息加以连贯的分析,并可以对研究的样本以统计学分析方法做一定的筛选和评价。因此,本研究聚焦于桦褐孔菌多糖对乳腺癌免疫浸润的影响,围绕桦褐孔菌多糖对小鼠乳腺癌细胞株4T-1的体内活性开展研究。揭示桦褐孔菌多糖的抑癌机制和增强临床乳腺癌免疫疗法的效果。本课题以小鼠乳腺癌细胞株4T-1作为研究对象,首先利用生物信息学筛选出乳腺癌相关的免疫分子靶点,再应用转录组学的手段,考察桦褐孔菌多糖缓解4T-1鼠乳腺癌的机制,并交叉对比,筛选出的免疫相关分子靶点的变化趋势。最后,利用PCR及WB手段对小鼠肿瘤组织内上述免疫相关分子靶点的调控情况进行了深入的研究,拟确定桦褐孔菌多糖对于乳腺癌免疫浸润的影响。主要结果如下:1.野生桦褐孔菌多糖含量较高,使用热水浸提法可以获得粗多糖混合物13.6g,除杂后获得多糖3.2g,经过离子交换柱洗脱分离后,得到IOP1至IOP6共6个主要组分,多糖的总体回收率在89.2%。根据MTT实验获得的结果可知,桦褐孔菌多糖可以对人乳腺癌细胞MDA-MB-231及鼠乳腺癌细胞4T-1产生较好的抑制作用,其中以组分IOP-5的抑制效果最好,并筛选其参与后续的抗肿瘤实验。IOP-5对人乳腺癌细胞MDA-MB-231及鼠乳腺癌细胞4T-1的IC50分别为294±55.7μg·mL-1及214.5±32.1μg·mL-1。2.实验从数据库内共获得了1094个BC患者数据。并获得了1399个与生存相关的免疫相关DEGs。本研究利用多变量Cox分析,利用上述DEGs建立起TAIG风险评价模型,依据研究结果可知,较高的TAIG水平意味着较低的临床生存率、较高的AJCC-TNM分期水平及晚期乳腺癌病理分期。同时发现,发现高TAIG组内,CD8+T细胞、记忆静止CD4+T细胞、M0巨噬细胞和M2巨噬细胞等的免疫浸润密度明显降低。而TAIG评分系统内的17个免疫相关基因中,PCDHGA2、SPIB、ADRB1、FLT3和NFKBIE是最为重要的免疫相关分子标记物。3.围绕转录组学的研究结果可知,桦褐孔菌多糖IOP-5可有效的抑制乳腺肿瘤在模型小鼠体内的生长。其会降低体内乳腺癌肿瘤的生长速度和最终的瘤重,且安全有效。同时,其抑癌活性同浓度正相关。以高剂量组为模型,共筛选出3135个差异表达基因,其中192个同免疫相关。同时,依据本研究建立的TAIG指数,筛选出同免疫浸润相关性较高的分子标记物包含:NFKBI（上调）,FLT3、ADRB1、SPIB及IFNE（下调）等5个。可将上述分子标记物视作桦褐孔菌多糖IOP-5抑制乳腺癌发生免疫浸润的核心分子标记物。4.桦褐孔菌多糖IOP-5能显着抑制鼠乳腺癌细胞4T-1的增殖能力,并呈浓度依赖关系。而其对乳腺癌免疫浸润的机制,是通过上调NFKBI,进而抑制NFKB信号通路。而其通过下调FLT3,ADRB1,NFKBI,IFNE的表达,调节乳腺癌免疫微环境,进而起到抑制肿瘤转移的作用。桦褐孔菌多糖对乳腺癌肿瘤免疫浸润的调控关系,同桦褐孔菌多糖IOP-5的浓度呈正比。
宗帅[5]（2020）在《粒毛盘菌多糖抗肿瘤作用及其机制研究》文中研究指明前期,本课题组已经对粒毛盘菌YM130胞外多糖（LEP130）的结构进行了解析,并发现了LEP130的抗肿瘤活性。然而其抗肿瘤作用机制尚不清楚。本文研究了LEP130的抗肿瘤作用及其与化疗药物的协同作用,并对其作用机制进行了初步的探讨。主要研究结果如下:1)利用体外实验研究了LEP130与5-氟尿嘧啶（5-FU）联用对Hep G2细胞的抑制作用。MTT实验结果表明,LEP130与5-FU联用对Hep G2细胞活性具有显着的抑制作用,该抑制作用强于LEP130或5-FU单独处理,并且两者间具有显着的协同作用。而LEP130对人皮肤成纤维细胞HSF、人正常肝细胞LO2没有明显作用,这表明LEP130对正常细胞是安全无毒的。Western blot等实验结果表明,LEP130能降低胸苷酸合酶和二氢嘧啶脱氢酶的表达,从而抑制5-FU的降解失活。另外,LEP130能抑制Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt/m TOR介导的细胞存活通路,增强Hep G2细胞对5-FU的敏感性,防止细胞产生耐药性。LEP130还能抑制Nrf2介导的细胞抗氧化防御系统,增加细胞内活性氧,并破坏线粒体膜电位,激活线粒体凋亡途径。还发现,LEP130能促进p53活化,抑制NF-κB及其下游靶蛋白的表达,导致细胞周期停滞在S期,并且抑制DNA碱基切除修复和错配修复,继而增强5-FU的作用效果。因此,LEP130与5-FU通过多种方式发挥体外抑制Hep G2细胞的协同增效作用。2)采用H22荷瘤小鼠模型,研究了LEP130与环磷酰胺（CTX）对H22肿瘤生长的抑制作用。结果表明,LEP130能激活Fas/Fas L介导的死亡受体途径,增加相关蛋白（如caspase 3、caspase 8、PARP1等）的表达,并通过t-Bid激活线粒体凋亡途径。LEP130还能通过抑制血管生成相关蛋白（如VEGF、b FGF、MMPs等）的表达,减少瘤内血管生成。此外,LEP130能提高H22荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数,促进T细胞、NK细胞和巨噬细胞向肿瘤组织中浸润,增加血清和肿瘤组织中免疫因子（IFN-γ、IL-1β、IL-2和TNF-α）的含量,继而激活抗肿瘤免疫系统抑制肿瘤的生长。还发现,LEP130能抑制Stat3和NF-κB介导的细胞存活蛋白（如Bcl-2、Bcl-XL、Survivin等）的表达,并抑制H22肿瘤细胞产生多药耐药性,继而增强CTX的抑瘤作用。同时发现LEP130能显着改善由CTX导致的肝损伤、肾损伤、免疫抑制等副作用,促进机体恢复健康。以上结果表明,LEP130与CTX联用能协同抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,并且LEP130能缓解CTX引起的副作用。3)利用S180荷瘤小鼠模型,研究了LEP130对抗肿瘤免疫系统的作用。体外实验表明LEP130不能抑制S180细胞的增殖,而体内实验证实LEP130能显着抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长。实验结果表明,LEP130主要通过激活机体免疫系统来发挥抑瘤作用。对S180荷瘤小鼠进行灌胃处理后发现,LEP130能引起辅助性T细胞向Th1型极化,并促进Th1细胞因子（IL-2和IFN-γ）的表达;抑制辅助性T细胞向Th2型极化,并抑制Th2细胞因子（IL-4和IL-10）的表达。另外,LEP130引起的高水平的IFN-γ被证明能调节肿瘤微环境中的巨噬细胞分型,促进巨噬细胞向M1型极化,继而发挥抑瘤作用。此外,LEP130能通过增加抑瘤性免疫细胞（如白细胞、B细胞和NK细胞等）和抑瘤性免疫细胞趋化因子（如CXCL9、CXCL10和CXCL13等）,抑制免疫抑制性细胞（如骨髓源性抑制细胞、调节性T细胞等）、免疫抑制细胞趋化因子（如G-CSF、M-CSF、CCL22等）以及免疫抑制因子（如TGF-β、IL-10、PEG2等）,改善免疫抑制性肿瘤微环境,增强免疫系统对肿瘤细胞的杀伤作用。最后,体外实验表明,LEP130能通过TLR4介导的NF-κB信号通路直接诱导原代巨噬细胞向M1型转化,发挥抑瘤作用。以上结果表明,LEP130能激活机体免疫系统抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长。4)采用AOM/DSS诱导的小鼠结肠癌模型,研究了LEP130对结肠癌的抑制作用以及对肠道菌群的影响。LEP130能显着缓解AOM/DSS导致的结肠癌小鼠体重减轻、结肠长度缩短,并有效抑制了结肠肿瘤的发生。另外,LEP130能显着改善结肠癌小鼠肠道的病理状况,缓解AOM/DSS导致的肠道损伤,并通过增加ZO-1、occludin、E-cadherin等蛋白的表达恢复肠屏障完整性。LEP130还能降低结肠癌小鼠结肠组织中的促炎因子（TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ）水平,抑制组织炎症。16S r RNA高通量测序结果表明,LEP130能改善结肠癌小鼠肠道菌群的结构与组成,增加肠道菌群的丰度和物种多样性。LPE130能降低（机会）致病菌和病原菌（如副杆菌属、大肠志贺氏杆菌、脱硫弧菌属、螺杆菌属、毛螺菌属-NK4A136组和厌氧支原体属等）的相对丰度,并增加短链脂肪酸产生菌和益生菌（如瘤胃梭菌属、毛螺菌属、雷沃氏菌属-NK3B31组、双歧杆菌属和罗斯氏菌属等）的相对丰度。非靶向代谢组学结果表明,LEP130能显着改善结肠癌小鼠肠道菌群的代谢状况,降低肠道中鹅去氧胆酸、脱氧胆酸和石胆酸含量,增加短链脂肪酸（乙酸、丙酸、正丁酸）和δ-生育酚含量,从而抑制结肠癌的发生。相关性分析结果表明,肠道菌群的调节与代谢物的变化具有高度的相关性。以上结果表明,LEP130能够抑制结肠癌的发生,并且这种抑制作用可能与LEP130对肠道微生物群及其代谢产物的调节相关。
杨懿[6]（2020）在《肝细胞源性MANF通过调节内质网应激介导的细胞凋亡减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤》文中进行了进一步梳理缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury,IRI）长期以来一直被认为是影响肝脏移植预后的主要因素。虽然已知缺血再灌注会造成肝脏不可逆的损伤,但受限于缺血再灌注损伤复杂的机制,目前尚没有完全避免再灌注损伤的方法。然而越发明确的是在缺血再灌注损伤过程中,细胞的内质网（endoplasmic reticulum,ER）功能出现了紊乱。于是,ER应激逐渐被认为是IRI发生发展的又一诱因。中脑星形胶质细胞神经营养因子（mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,MANF）是一种ER应激敏感蛋白,实验室前期研究显示缺血性脑损伤中MANF上调表达。虽然早期研究中MANF的功能研究主要是针对多巴胺能神经元和非多巴胺能神经元的神经保护作用。然而越来越多的研究显示,MANF对细胞凋亡和增殖具有调控作用,尤其是对足细胞、软骨细胞、胰腺细胞和视网膜神经节细胞均具有保护作用。然而,MANF对肝脏IRI的影响及相关机制尚无相关研究。目的:探究MANF蛋白如何影响小鼠肝脏IRI,并探究MANF影响肝脏IR的潜在机制。方法:为了研究MANF在IRI过程中的影响,我们使用了肝细胞特异性敲除MANF的基因敲除鼠(MANF hep-/-)和同窝出生的野生型小鼠（WT）。通过对肝门静脉部分夹闭,我们构建了70%IR模型,并且向干预组小鼠注射了MANF重组蛋白进行预处理。再灌注处理后我们对小鼠肝脏的细胞凋亡程度和凋亡蛋白的表达进行了检测。同时我们用AST、ALT、肝脏损伤面积以及Suzuki评分对各组小鼠的损伤情况进行了评估。体外实验中我们用小鼠的肝原代细胞进行了糖氧剥夺实验,在体外模拟了I/R过程。同时我们对MANF hep-/-鼠和WT鼠的原代肝细胞进行了转录组测序,寻找MANF敲除与相关信号通路的关联。我们还对肝脏组织进行了免疫组化和免疫荧光实验,对相关蛋白的表达和定位进行了检测。最后,我们运用CO-IP和质谱实验,检测并验证了潜在的可能与MANF结合的蛋白。结果:1.肝脏I/R损伤过程伴有MANF蛋白的上调表达首先我们通过对建模后小鼠的AST、ALT进行检测,鉴定了70%I/R模型建立的成功与否。通过对造模后WT小鼠肝脏的MANF蛋白进行检测,我们可以发现经过三小时的再灌注处理即已经可以看见显着的MANF表达上调。通过HE和IHC实验,我们观察到MANF主要在损伤区域周边大量表达。2.肝细胞MANF敲除加重了I/R损伤我们用Western blotting和PCR实验验证了肝细胞MANF敲除的效率,在肝脏组织中MANF几乎被完全敲除。造模后,我们对小鼠进行了AST、ALT检测和HE染色,结果显示,相比较于WT小鼠,MANF hep-/-小鼠的AST和ALT在再灌注3 h和6 h后均显着上调,相一致的是在对HE结果进行Suzuki损伤评估后,我们观察到MANFhep-/-小鼠相比较于WT小鼠显示出更严重的肝脏损伤3.肝实质细胞MANF的敲除加重了肝脏I/R损伤造成的肝细胞凋亡为了探究MANF蛋白是否影响I/R损伤后肝细胞的存活,我们从WT和MANFhep-/-小鼠中分离了原代肝细胞,并进行糖氧剥夺实验（Oxygen Glucose Deprivation,OGD）处理,同时检测MANF和Annexin V的共定位。有趣的是我们发现膜上Annexin V的表达与细胞MANF的表达呈相反关系,MANF高表达的细胞胞膜上的Annexin V表达较少。TUNEL荧光实验结果也显示,MANFhep-/-小鼠与WT鼠相比显着增加原代肝细胞和肝组织中凋亡细胞的数量。通过对凋亡相关标志物Bcl-2、BAX和c-caspase-3进行western blotting检测。我们发现与WT小鼠相比,MANF hep-/-小鼠中Bcl-2/BAX比例较低,而剪切型caspase-3水平较高。4.重组MANF蛋白在肝脏I/R过程中可以通过抑制细胞的凋亡来保护肝细胞为了证明MANF对I/R诱导的肝损伤具有保护作用,我们通过尾静脉向MANFhep-/-小鼠注射了（His-tagged）rh MANF。结果显示注射rh MANF可以显着的减轻了MANF hep-/-小鼠肝脏的I/R损伤。通过免疫组化的方法我们在肝组织中检测到了rh MANF的存在。并且我们在注射rh MANF后发现谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）显着减低,由此验证了rh MANF的保护作用。同时,rh MANF还增加了Bcl-2/BAX的比例,降低了肝组织中剪切型caspase-3的水平5.MANF参与肝脏I/R诱导的非折叠蛋白反应首先我们观察到内质网敏感指标BIP和CHOP在肝脏组织I/R后上调表达。表明I/R会诱导ER应激的发生。肝细胞特异性敲除MANF后,BIP和CHOP的表达上调,且在肝脏I/R损伤后进一步显着上调。这些结果表明,肝细胞中MANF的缺乏会引起ER应激。I/R后与WT小鼠相比,MANFhep-/-小鼠肝组织中的p-IRE1α、ATF4、ATF6的表达水平显着增加。这一结果同体外原代肝细胞OGD实验相一致。MANF hep-/-小鼠的原代肝细胞在经过OGD处理后的24小时内显着上调了p-IRE1α、ATF4、ATF6和BIP的表达水平。同时这些结果也表明,无论有无肝脏缺血再灌注损伤,肝细胞MANF敲除均可激活UPR信号通路,尤其是ATF4/CHOP通路。为了了解MANF能否能缓解MANF敲除的影响,我们将纯化的rh MANF蛋白用于MANF hep-/-小鼠。结果显示,与生理盐水组相比,rh MANF处理组BIP、p-IRE1α、ATF6和ATF4的表达均显着下调。所以我们认为MANF参与了组织I/R诱导的ER应激和UPR信号的激活。6.肝细胞特异性敲除MANF激活了JNK/c-Jun/CHOP信号通路我们通过对WT和MANF hep-/-小鼠的原代肝细胞进行转录组测序,结果发现了652个差异表达基因,其中448个基因上调表达,204个基因下调表达。通过对差异基因进行KEGG聚类分析我们发现,差异基因在主要集中在内质网蛋白加工途径和MAPK信号途径。其中Hsp A5（BIP）、Ddit3（CHOP）、JUN等重要伴侣分子和转录因子在MANF敲除的肝细胞中均上调表达,而JNUB、JUND、FOS的表达则无明显变化。这一结果表明,JNK/c-Jun的激活可能在MANFhep-/-小鼠I/R引发UPR的过程中起到重要作用。为了进一步验证JNK、Jun和CHOP的活化,我们用western blotting和免疫组织化学方法测定了p-JNK、c-Jun、CHOP表达水平与定位。与WT小鼠相比,在MANFhep-/-小鼠中我们发现了p-JNK、c-Jun和CHOP表达水平升高。本结果提示,MANF敲除通过激活肝细胞中JNK/c-Jun/CHOP通路参与到了I/R诱导的肝损伤过程中。7.MANF通过与GRP75相互作用调节其蛋白折叠功能为了进一步探究MANF对UPR通路的直接影响,我们对CO-IP实验得到的蛋白溶液进行了质谱检测,结果发现MANF可以和GRP75结合。我们通过免疫荧光标记实验和western blotting检测验证了两者之间的结合。并且在I/R后的肝脏中也发现两者的共定位,说明肝脏I/R损伤过程中存在MANF与GRP75的相互作用。通过对再灌注组织中的GRP75进行检测,我们发现小鼠再灌注损伤显着的上调了GRP 75的表达,说明GRP 75同BIP一样参与I/R损伤过程。并且经过I/R损伤后,MANF hep-/-肝组织中的GRP 75表达水平显着高于WT肝组织。且线粒体非折叠蛋白反应的标志物CLPP在敲除MANF后也显着上调,说明了敲除MANF后可能会影响GRP 75的生物活性,进而加重了内质网和线粒体的非折叠蛋白反应。结论:总结以上结果,肝脏I/R过程上调MANF的表达。MANF参与肝脏I/R过程并通过抑制内质网应激诱导的UPR反应减少凋亡蛋白的表达,同时肝细胞敲除MANF激活了JNK/c-Jun/CHOP通路,进一步加重了I/R造成的细胞凋亡。MANF还可能通过结合GRP75参与肝脏I/R产生的非折叠蛋白的处理过程。
张思培[7]（2020）在《基于聚（β-氨基酯）的智能纳米载体的构建及其用于肿瘤联合治疗的研究》文中进行了进一步梳理研究背景和目的:癌症诱发的死亡率逐年攀升,化学药物治疗（化疗）仍然是目前临床治疗多种癌症的主要手段,但化疗药物通常缺乏靶向性,会对正常组织细胞产生一定的毒副作用,并且长期治疗带来的耐药问题也是造成癌症患者死亡的主要原因之一。大量研究表明化疗联合其他治疗方法（如基因、环氧化酶-2（COX-2）抑制或免疫治疗等）具有协同抗癌疗效,能够有效逆转肿瘤耐药。纳米载体系统在靶向递送化疗药物以及联合其他治疗方法等方面具有独特优势。此外,智能纳米载体能够通过感受肿瘤病灶的内源性刺激（弱酸性条件与还原性环境等）并产生响应来实现药物的可控释放,进而有利于增强药物疗效,降低药物毒副作用。聚（β-氨基酯）（PBAE）是一类可生物降解的阳离子聚合物,具有显着的pH-响应性,能够通过“质子海绵”效应实现药物或基因在肿瘤细胞内的可控释放。本研究通过引入二硫键（S-S）合成了具有pH-与氧化还原-双重响应性的ssPBAE,并以其为材料构建了两种靶向纳米载体系统,用于高效共载、靶向递送与可控释放化疗药物与基因（或COX-2抑制剂）,以期实现逆转耐药以及协同增效的抗癌疗效。实验方法:第一部分:1.首先通过迈克尔加成的方法合成了结构单元中含有二硫键的聚（β-氨基酯）（ssPBAE）,并通过琼脂糖凝胶电泳考察ssPBAE的氧化还原响应能力。通过二乙烯三胺对ssPBAE进行胺基化修饰制备胺基化的ssPBAE（NH-ssPBAE）。化疗药物甲氨蝶呤（MTX）与NH-ssPBAE通过酰胺键相连合成聚合物前药ssPBAE-MTX。利用傅里叶变换红外光谱（FT-IR）与核磁共振氢谱（1H NMR）对ssPBAE-MTX进行结构表征。利用紫外分光光度计测定ssPBAE-MTX中MTX的载药量,而后ssPBAE-MTX聚合物前药通过静电吸附作用负载质粒DNA（p DNA）,制备ssPBAE-MTX/p DNA纳米复合物。随后采用电荷吸附将具有肝癌靶向性以及电荷翻转能力的羧基化普鲁兰多糖衍生物（CAPL）包覆于纳米复合物表面,制备CAPL/ssPBAE-MTX/p DNA纳米共载体系。利用透射电子显微镜（TEM）考察CAPL/ssPBAE-MTX/p DNA纳米共载体系的形貌,利用纳米粒度分析仪考察纳米共载体系的粒径、聚合物分散指数（PDI）与Zeta电位,通过动态透析方法考察纳米共载体系的pH/氧化还原响应性释药性能。2.利用激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）考察CAPL/ssPBAE-MTX/p DNA纳米共载体系在人源肝癌细胞系Hep G2内的细胞摄取以及溶酶体逃逸性质,通过CCK-8细胞毒性实验考察CAPL/ssPBAE-MTX/p DNA纳米共载体系对人源肝癌细胞系Hep G2的细胞增殖影响。第二部分:1.以ssPBAE与PLGA作为载体材料,通过超声乳化溶剂挥发法制备共载疏水性药物阿霉素（DOX）与选择性COX-2抑制剂塞来昔布（CXB）的ssPBAE/PLGA/DOX/CXB（PPDC）纳米核。通过电荷吸附作用将透明质酸（HA）包覆于PPDC纳米核表面,得到HPPDC纳米共载体系。利用TEM对HPPDC纳米共载体系的形貌进行表征,并使用纳米粒度分析仪检测其粒径、PDI和Zeta电位。采用高效液相色谱法（HPLC）测定DOX和CXB在HPPDC纳米共载体系中的载药量和包封率,并采用动态透析方法考察纳米共载体系的pH/氧化还原响应性药物释放性能。2.在细胞水平考察HPPDC纳米共载体系逆转耐药性质:选取对DOX敏感的人乳腺癌MCF-7细胞系与对DOX不敏感的人乳腺癌MCF-7/ADR耐药细胞系,对比考察了HPPDC纳米共载体系的入胞性能、细胞内释放药物的能力、细胞毒性作用和诱导细胞凋亡能力。然后选取MCF-7/ADR耐药细胞系考察HPPDC纳米共载体系在m RNA水平对MDR1基因表达的影响,以及对COX-2与P-gp蛋白表达水平的影响。3.构建MCF-7/ADR荷瘤BALB/c裸鼠模型,并对HPPDC纳米共载体系进行Cy5.5近红外探针标记。尾静脉注射给药后,采用体内荧光成像技术考察HPPDC-Cy5.5纳米共载体系的组织分布与肿瘤蓄积性质,以评价共载体系的体内靶向性能。随后考察HPPDC纳米共载体系对MCF-7/ADR荷瘤BALB/c裸鼠的体内抗肿瘤效果,包括对肿瘤生长的抑制作用及其对化疗药物的减毒作用。实验结束后处死小鼠并摘除其肿瘤组织,从肿瘤组织的m RNA和蛋白水平进一步考察HPPDC纳米共载体系对COX-2和P-gp蛋白表达的影响。研究结果:第一部分:1.成功制备含有二硫键的ssPBAE,并且琼脂糖凝胶电泳实验结果显示ssPBAE具有良好的氧化还原响应能力。二乙烯三胺对ssPBAE进行胺基化修饰得到NH-ssPBAE;MTX的γ-羧基与NH-ssPBAE的胺基通过酰胺反应合成聚合物前药ssPBAE-MTX;红外光谱与核磁共振氢谱结果证实MTX成功与NH-ssPBAE相连。ssPBAE-MTX聚合物前药中MTX的载药量为6.24±0.45%。ssPBAE-MTX能够通过电荷作用负载p DNA,形成ssPBAE-MTX/p DNA纳米复合物,具有良好的体外稳定性。普鲁兰多糖衍生物CAPL通过静电吸附作用成功包覆于ssPBAE-MTX/p DNA纳米复合物表面,获得CAPL/ssPBAE-MTX/p DNA纳米共载体系。CAPL/ssPBAE-MTX/p DNA纳米共载体系粒径约为120 nm,分布均匀,具有明显的“核-壳”结构。此外,纳米共载体系在肿瘤微环境的体外模拟条件下表现出显着的pH与氧化还原双重响应性释药能力。2.通过去唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）介导的内吞作用,CAPL/ssPBAE-MTX/p DNA纳米共载体系可有效地被人肝癌细胞Hep G2摄取,实现基因和化疗药物的协同递送。肿瘤细胞内涵体/溶酶体的弱酸性条件高效触发CAPL的电荷翻转与ssPBAE的“质子海绵”效应,从而促进CAPL/ssPBAE-MTX/p DNA纳米共载体系成功从内涵体/溶酶体逃逸到细胞质中。然后在细胞质的高谷胱甘肽环境中,二硫键发生断裂并诱导ssPBAE降解,从而进一步触发p DNA和MTX的释放,发挥其对肝癌的协同治疗作用。第二部分:1.为优化载体性质并达到控释的目的,将ssPBAE与PLGA混合并通过超声乳化溶剂挥发法制备得到共载DOX与CXB的PPDC纳米核。PPDC纳米核具有均一的球形形貌和密实的内部结构,粒径约为114 nm,PDI较小,呈现出高正电性,Zeta电位约为+38 m V。HA通过静电吸附作用包覆于PPDC纳米核表面,得到HPPDC纳米共载体系。HPPDC纳米共载体系呈均一球形,具有明显的“核-壳”结构,粒径约为212.6 nm,PDI较小。PPDC纳米核中DOX和CXB的载药量分别为3.92%和7.98%;HPPDC纳米共载体系中DOX和CXB的载药量分别为2.15%和4.02%;在两种纳米载体系统中DOX与CXB的包封率均高于70%。HPPDC纳米共载体系具有良好的体外稳定性,且在体外模拟癌细胞内溶酶体pH和谷胱甘肽微环境下,表现出显着的pH与氧化还原双重响应性药物释放性能。2.据报道CXB能够通过抑制肿瘤细胞中多药耐药（MDR）相关蛋白P-gp的表达,进而逆转肿瘤MDR。研究证实P-gp的高表达是人乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADR的主要耐药机制,并且该细胞系特征性地高表达CD44。HPPDC纳米共载体系能够通过HA与CD44高亲和性介导的内吞作用被MCF-7/ADR细胞有效摄取;入胞后通过对内涵体/溶酶体的弱酸性条件与胞内还原性环境的先后响应释放CXB与DOX,分别发挥COX-2抑制效应与细胞毒作用。在MCF-7/ADR细胞中,HPPDC纳米共载体系表现出高效的杀伤作用与细胞凋亡诱导效应,并且显着地下调了P-gp的m RNA与蛋白表达。3.成功构建了MCF-7/ADR荷瘤裸鼠模型。经尾静脉注射后,HPPDC-Cy5.5纳米共载体系表现出良好的肿瘤靶向性,能够通过EPR效应与HA/CD44介导的主动靶向作用有效递送药物至肿瘤病灶并促进药物在肿瘤部位的蓄积。HPPDC纳米共载体系显着抑制了MCF-7/ADR肿瘤的体内生长,提高了DOX的抗肿瘤疗效,并且明显降低了肿瘤组织中COX-2和P-gp的蛋白表达。此外,HPPDC纳米共载体系对荷瘤小鼠体重及其正常器官组织未造成明显的影响。结论:本研究合成了具有pH与氧化还原双重响应性的ssPBAE,并以其为材料构建了两种智能响应性纳米共载体系（CAPL/ssPBAE-MTX/p DNA与HPPDC）。CAPL/ssPBAE-MTX/p DNA纳米共载体系能够促进基因与化疗药物DOX的高效入胞及其在胞内的可控释放,表现出对肝癌的化疗增敏效应。HPPDC纳米共载体系具有良好的乳腺癌靶向性能,表现出对MDCF-7/ADR耐药肿瘤体内外生长的高效抑制效率,能够通过下调COX-2与P-gp的表达逆转乳腺癌耐药。可见,基于ssPBAE的纳米载体系统具有显着的pH与氧化还原双重响应性,可用于不同作用机制抗肿瘤药物的高效共载、靶向递送与可控释放,在肿瘤联合治疗方面具有独特的优势与巨大的应用潜力。
向润清[8]（2020）在《夏枯草提取物中熊果酸抑制甲状腺乳头状癌细胞TPC-1增殖的实验研究》文中研究表明目的:甲状腺癌（Thyroid Cancer,TC）是发生于甲状腺的恶性肿瘤,也是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,其中甲状腺乳头状癌（Papillary Thyroid Carcinoma,PTC）起源于甲状腺实质的分化型甲状腺癌,是最常见的甲状腺恶性肿瘤,PTC的发生、发展是一个复杂的病理生理过程。课题组前期研究结果显示夏枯草提取物中熊果酸（Ursolic Acid,UA）可下调促癌基因PI3K、AKT、mTOR的表达,诱导人甲状腺乳头状癌细胞（TPC-1）凋亡。本实验将基于p53/MAPK信号通路探讨UA对TPC-1细胞增殖的抑制作用,为UA的临床应用及新药开发提供实验依据和参考。方法:1夏枯草提取物中UA对TPC-1细胞增殖的影响1.1夏枯草水、乙醇、乙酸乙酯提取物对TPC-1细胞增殖的影响将夏枯草果穗粉碎后分别加入纯净水、95%乙醇浸泡、煮沸、过滤、浓缩、灭菌,并取一部分乙醇浓缩液用乙酸乙酯萃取后浓缩、灭菌,得到夏枯草水、乙醇、乙酸乙酯提取物,将三种提取物浓度分别制备成75、37.5、18.75、9.375、4.6875、2.34375 mg/mL。采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT法）观察夏枯草三种提取物不同浓度作用TPC-1细胞48 h后的增殖情况,并计算相应的IC50值。1.2夏枯草乙酸乙酯提取物中UA、齐墩果酸（OA）、科罗索酸（CA）、山楂酸（MA）、白桦酯酸（BA）的含量测定采用C18-柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流速:1.0 mL/min,柱温:25℃,紫外检测波长:210 nm,流动相:甲醇-乙腈-0.1%磷酸（80:5:15）的色谱条件进行含量测定。1.3夏枯草提取物中UA的提取及含量测定将夏枯草粉碎,用甲醇浸泡、超声、过滤、浓缩成浸膏,加水分散,加乙酸乙酯萃取,萃取三次,合并乙酸乙酯液,减压浓缩至膏体。取膏体用甲醇溶解,用HPLC-ELSD检测纯度,检测条件为流动相:甲醇:水=98:2,流速:1 mL/min,检测器:ELSD,色谱柱:C18（4.6 mm×250 mm,5μm）。将样品上样,用制备液相色谱分离纯化、收集、浓缩至粉末,得UA样品,制备液相色谱条件:色谱仪:varian SD1,色谱柱:C18（250 mm×50 mm,10 um）,流速:40 mL/min,流动相:甲醇:水=95:5。1.4夏枯草提取物中UA对TPC-1、人正常甲状腺上皮细胞（Nthy-ori3-1）细胞增殖的影响采用不同浓度UA分别干预TPC-1、Nthy-ori3-1细胞（对照组0μM,实验组1.5μM、3μM、6μM、12μM、24μM）,MTT法观察UA对TPC-1、Nthy-ori3-1细胞增殖的影响。2夏枯草提取物中UA作用PTC的RNA测序分析采用RNA-Seq测序技术对Nthy-ori3-1组、TPC-1细胞组、（UA 3μM+TPC-1、UA 6μM+TPC-1、UA 12μM+TPC-1）细胞组进行转录组分析,以照相对表达倍数（Fold Change）≥1.5,P值<0.05的标准筛选出差异表达的基因,然后对这些差异表达的基因进行GO、KEGG功能富集分析。采用实时荧光定量PCR（QRT-PCR）验证富集通路p53/MAPK相关基因p53、Ras、MEK和ERK、TSHR、BRAF、DDR1、PAK4、PKACa、c-Myc、PIK3Ca mRNA的表达水平并进一步确定所选通路的准确性。3夏枯草提取物中UA对TPC-1的作用及机制研究3.1 UA诱导TPC-1细胞凋亡选取处于对数生长期的TPC-1细胞用于实验,用不同浓度的UA作用TPC-1细胞48h,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡的变化。3.2 UA对TPC-1细胞周期的影响选取处于对数生长期的TPC-1细胞用于实验,用不同浓度的UA作用TPC-1细胞48 h,流式细胞术（FCM）检测细胞周期中各时期细胞比例的变化。3.3夏枯草提取物中UA对TPC-1细胞p53/MAPK信号通路相关蛋白的影响选取处于对数生长期的TPC-1细胞用于实验,采用不同浓度UA干预细胞（阴性对照组、溶媒对照组、UA 3μM、UA 6μM、UA 12μM）,Western blot法检测经UA干预48 h后TPC-1细胞中TSHR、BRAF、PAK4、P-PAK4、PKACa、p53、c-Myc蛋白的表达情况。结果:1夏枯草提取物中UA对TPC-1细胞增殖的影响1.1夏枯草水、乙醇、乙酸乙酯提取物对TPC-1细胞增殖的影响夏枯草水、乙醇、乙酸乙酯提取物不同浓度作用TPC-1细胞后,得到的IC50值分别为:30.473、47.617、18.433 mg/mL,即夏枯草乙酸乙酯部分抑制TPC-1细胞增殖的作用较强。1.2夏枯草乙酸乙酯提取物中UA、OA、CA、MA、BA的含量测定夏枯草乙酸乙酯提取物中UA、OA、CA、MA、BA色谱峰与杂质峰分离效果良好,色谱峰没有出现拖尾的现象,UA峰面积最大。1.3夏枯草提取物中UA的提取及含量测定制备得到UA样品经HPLC-ELSD检测,纯度较纯,在线性范围内,UA含量随着超声时间的延长而增加,且在60 min时最高。1.4夏枯草提取物中UA对TPC-1、Nthy-ori3-1细胞增殖的影响MTT法测得UA作用TPC-1细胞后的IC50值为9.19±0.35μM,但对Nthy-ori3-1细胞增殖没有抑制作用,后续实验UA浓度低、中、高分别取3、6、12μM。2夏枯草提取物中UA作用PTC的RNA测序分析由差异表达基因富集的KEGG通路得出:与Nthy-ori3-1细胞组比较,TPC-1细胞组下调的通路有p53信号通路,上调的通路有MAPK信号通路等;与TPC-1细胞组比较,（UA 3μM+TPC-1、6μM+TPC-1、12μM+TPC-1）细胞组上调的通路有p53信号通路,下调的通路有MAPK信号通路等,富集程度随浓度的增大而增大。对p53信号通路和MAPK信号通路上的基因进行QRT-PCR验证,结果显示:与阴性对照组比较,UA 3、6、12μM给药组细胞内基因p53 mRNA表达水平上调（P<0.05）,Ras、MEK和ERK mRNA及相关基因TSHR、BRAF、DDR1、PAK4、PKACa、c-Myc、PIK3Ca mRNA表达水平下调（P<0.05）,将p53/MAPK信号通路作为后面的研究方向。3夏枯草提取物中UA对TPC-1的作用及机制研究3.1 UA诱导TPC-1细胞凋亡流式检测结果显示,UA作用TPC-1细胞48 h后,与阴性对照组相比,UA不同浓度组的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率差异均有统计学意义（P<0.05）,凋亡率随着浓度的增加而增加。3.2 UA对TPC-1细胞周期的影响不同浓度的UA作用TPC-1细胞48 h后,细胞周期各时期的细胞比例发生变化,与阴性对照组相比,随着UA浓度的提高S期细胞所占比例明显增多,差异有统计学意义（P<0.05）。3.3夏枯草提取物中UA对TPC-1细胞p53/MAPK信号通路相关蛋白的影响Western blot结果显示,与阴性对照组相比,溶媒对照组p53、TSHR、BRAF、c-Myc、PKACa、PAK4、P-PAK4等蛋白差异无统计学意义（P>0.05）;不同浓度UA给药组细胞中p53、TSHR、BRAF、c-Myc、PKACa、PAK4、P-PAK4等蛋白均有表达,UA作用于TPC-1细胞48 h后,随着UA浓度的增加,p53蛋白的表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）,TSHR、BRAF、PKACa、PAK4蛋白的表达均下调,差异有统计学意义（P<0.05）,c-Myc、P-PAK4蛋白的表达均下调,在UA浓度为6、12μM时,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:夏枯草提取物中UA抑制人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1增殖的作用,与促进细胞凋亡、阻滞细胞周期在S期、促进p53信号通路、抑制MAPK信号通路有关。
沈珺珺[9]（2020）在《δ-生育三烯酚抗炎抗癌的生理功能及其分子机理研究》文中研究说明δ-生育三烯酚（δ-tocotrienol）是维生素E的重要组成成分,然而在关于维生素E的研究中大部分是研究生育酚,尤其是α-生育酚,然而最近研究表明δ-生育三烯酚（δ-tocotrienol）在抗炎和抗部分种类的癌症效果比生育酚更显着,并且δ-生育三烯酚比γ-生育三烯酚在多种肿瘤的抗癌效果方面甚至优于γ-生育三烯酚和维生素E的其他组份,然而对δ-生育三烯酚（δ-tocotrienol）抗炎以及抗鼻咽癌的分子机理并未有深入地研究。鼻咽癌是一种在中国南方、东南亚、非洲北部、中东和北极地区发病率比较高的癌症,所以在我们的日常饮食中能到找到有肿瘤化学预防的物质对于鼻咽癌高发区的人的健康有十分重要的意义。本课题采用超声法提取米糠油以及CO2超临界提取δ-生育三烯酚,并对δ-生育三烯酚用HPLC进行了检测,然后以RAW264.7和CNE1细胞为模型,评估δ-生育三烯酚对炎症的巨噬细胞RAW264.7体外模型和鼻咽癌的细胞模型的抗炎和抗癌的功效,在此基础上,探讨δ-生育三烯酚抗炎以及抗癌的分子机理,为进一步深入研究δ-生育三烯酚和开发δ-生育三烯酚的各种功能性食品、保健品提供科学的理论依据。1.δ-生育三烯酚的提取与检测将米糠干燥并粉碎,装入高压容器中。接下来在CO2超临界萃取装置上萃取米糠油并用分析天平定时称重。用高效液相色谱（HPLC）对米糠油进行分离和检测,得到的实验结果为δ-生育三烯酚在米糠油中的含量是132.7μg/kg.与标准品相对照,则分离的δ-生育三烯酚的纯度为96.2%。2.δ-生育三烯酚的抗炎功能及其分子机理研究为了从细胞层面的体外模型观察δ-生育三烯酚的抗炎作用,本研究利用RAW264.7细胞,观察δ-生育三烯酚对经过脂多糖（LPS）诱导后的RAW264.7细胞活性的抑制效果。首先,光学显微镜观察和MTS分析发现0-80μM浓度下δ-生育三烯酚对RAW264.7细胞的存活无显着毒性。脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞RAW264.7结果表明20、40、80μMδ-生育三烯酚能显着抑制RAW264.7的促炎因子的表达。LPS诱导组对比对照组,促炎因子TNFα、IL-6、IL-1β、i NOS的m RNA表达量和蛋白表达明显上升,对比LPS组,δ-生育三烯酚组能够降低这些m RNA和蛋白质表达,且结果呈现出一定剂量依赖关系。研究发现,ERK1/2、JNK、p38蛋白磷酸化水平受到明显抑制,且呈剂量依赖性,说明δ-生育三烯酚在炎症反应中能抑制MAPK信号通路的活化,从而抑制转录因子AP-1、NF-κB活化和炎症因子的表达。结果表明,δ-生育三烯酚通过JNK和ERK1/2的磷酸化调节PPARα的磷酸化,通过调节由JNK和ERK1/2和p38来调节PPARγ,从而抑制炎症因子的表达。3.δ-生育三烯酚对鼻咽癌细胞CNE1的促使凋亡和抑制增殖作用及其分子机理研究本研究立足于评估δ-生育三烯酚对鼻咽癌细胞CNE1的促使凋亡和增殖的影响,发现在δ-生育三烯酚处理鼻咽癌CNE1细胞后,在光学显微镜和Hoechst33258荧光染色的细胞形态学方面在0-72 h间有明显的有促使凋亡的作用,并且连同MTS检测的结果表明δ-生育三烯酚对CNE1细胞增殖抑制率在0-80μM明显地呈剂量依赖特征。用细胞流式仪分别对δ-生育三烯酚处理的CNE1细胞的凋亡过程和增殖周期进行检测。在诱导凋亡方面通过Western blotδ-生育三烯酚明显地下调Bcl-2,而Bax,Caspase-3,Caspase-9等调控细胞凋亡的关键靶基因的转录和表达则上调并呈剂量依赖的特点,Caspase-8无明显变化。而在抑制增殖方面则明显地下调Cyclin D1,CDK2,CDK4,提示δ-生育三烯酚能下调细胞周期素的表达和抑制CDK的活性。通过实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白印迹发现,不同浓度的δ-生育三烯酚处理后,CDKI中p16、p18、p21、p27和p53表达明显上调,且呈剂量依赖性,但p15、p18和p19表达则无明显改变。说明δ-生育三烯酚可能通过下调细胞周期素的表达、抑制CDK的活性和上调一些CDKI表达阻滞细胞周期,从而抑制癌细胞的增殖。结果显示,δ-生育三烯酚通过p16/CDK4/cyclin D1引起CNE1细胞周期的阻滞。本研究运用了基因芯片来分析δ-生育三烯酚对CNE1细胞周期和细胞增殖的影响,发现有169个基因上调,167个基因下调。研究发现δ-生育三烯除了干预MAPK信号通路外,还能通过干预多条信号通路和多靶点抑制鼻咽癌的增殖。因此,δ-生育三烯酚通过Caspase-3信号通路触发CNE1细胞凋亡。这两个信号通路都受NF-κB调控。总的来说,我们认为δ-生育三烯醇在CNE1细胞中发挥抗癌作用的通路是NF-κB信号通路。
向润清,张艳娇,黄宽,林艾和,陈玉,高雪娟,张芳,范源[10]（2020）在《夏枯草提取物的药理作用和研究进展》文中认为夏枯草为临床常用中药,具有清火明目、软坚散结的功效。夏枯草常用提取物为水提取物、醇提取物、乙酸乙酯提取物,3种提取物具有抗肿瘤、抗菌消炎、免疫调节、清除自由基及抗氧化、抑制病毒生长等多种药理作用。现综合近年来国内外文献报道,对夏枯草提取物的药理作用进行综述,为其研究和临床应用提供参考。
二、γ-干扰素对肝癌细胞株Hep-G2 Fas、Bcl-2表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、γ-干扰素对肝癌细胞株Hep-G2 Fas、Bcl-2表达的影响（论文提纲范文）
（1）“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文名称缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察 |
| 1 一般资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 纳入标准 |
| 2.2 排除标准 |
| 2.3 剔除标准 |
| 2.4 退出标准 |
| 2.5 中止标准 |
| 2.6 观察指标:包括安全性观察指标和疗效性观察指标 |
| 2.7 疗效判断 |
| 3 治疗方法 |
| 4 统计学分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 三组患者基线资料比较 |
| 5.2 三组患者治疗前后生存率及生存期比较 |
| 5.3 三组患者治疗前后肿瘤大小比较 |
| 5.4 三组患者治疗前后生化指标水平比较 |
| 5.5 三组患者中医证候评分比较 |
| 5.6 三组患者生存质量评分比较 |
| 5.7 观察指标对患者疗效及预后的影响 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”对晚期肝癌患者生存率及生存期的影响 |
| 2 肝癌肝再生微环境及“补肾生髓成肝”的改善作用 |
| 3 “补肾生髓成肝”对患者中医证候评分及生存质量的影响 |
| 4 “补肾生髓成肝”对患者并发症及预后的影响 |
| 参考文献 |
| 第二部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的疗效机制研究 |
| 1 研究样本及方法 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 实验操作流程 |
| 2 统计学处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 肝再生相关细胞因子正态性检验结果 |
| 3.2 肝再生相关细胞因子在各组人群中表达的差异性 |
| 3.3 肝再生相关细胞因子表达水平之间的相关性分析 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”疗法相关研究进展 |
| 2 “补肾生髓成肝”改善肝再生微环境防治肝癌的疗效机制 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述一 肝癌微环境的研究现状 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 中医药影响肝癌微环境的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中医证候评分量表 |
| SF-36 |
| 在校期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（2）阿克替苷通过p38MAPK信号通路对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用（论文提纲范文）
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| Abstract |
| 缩略语表 |
| 前言 |
| 第一部分 阿克替苷对H22 肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验细胞株 |
| 1.3 实验药品 |
| 1.4 主要实验试剂 |
| 1.5 主要实验仪器及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 H22 肝癌细胞培养方法 |
| 2.2 H22 肝癌荷瘤小鼠模型构建 |
| 2.3 实验动物分组给药 |
| 2.4 一般状况观察 |
| 2.5 瘤重抑制率计算 |
| 2.6 末次给药后相对肿瘤增殖率计算 |
| 2.7 HE染色 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 各组H22 肝癌荷瘤小鼠一般状况观察 |
| 3.2 各组H22 肝癌荷瘤小鼠体质量变化 |
| 3.3 各组H22 肝癌荷瘤小鼠瘤质量及抑瘤率变化 |
| 3.4 各组H22肝癌荷瘤小鼠瘤体积及末次给药后相对肿瘤增殖率变化 |
| 3.5 各组H22 肝癌荷瘤小鼠皮下移植瘤病理形态学改变 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 阿克替苷通过p38MAPK信号通路对H22 肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 主要实验试剂 |
| 1.2 主要实验仪器及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 免疫组织化学染色法 |
| 2.2 RT-PCR |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 各组H22 小鼠肝癌组织中p38MAPK、p-p38MAPK、p53、c-Myc蛋白的表达情况 |
| 3.2 各组H22 小鼠肝癌组织中p38MAPK、p53、c-Myc mRNA的表达情况 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 1 主要结论 |
| 2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 毛蕊花糖苷抗肿瘤机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（3）中药单体及复方对肝癌细胞中NF-κB相关信号通路的作用机制（论文提纲范文）
| 1 肝癌炎-癌转化过程中NF-κB通路表达情况与意义 |
| 2 中药单体对肝癌细胞中NF-κB相关通路作用机制 |
| 2.1 生物碱类 |
| 2.2 皂苷类 |
| 2.3 多酚类 |
| 2.4 有机酸类 |
| 3 中药复方对肝癌细胞中NF-κB相关通路作用机制 |
| 3.1 健脾益气方 |
| 3.2 益脾养肝方 |
| 3.3 芍药软肝方 |
| 3.4 十全大补汤 |
| 3.5消癌解毒方 |
| 3.6 益气活血软坚解毒方 |
| 4 讨论 |
（4）桦褐孔菌多糖抑制乳腺癌的免疫浸润的机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 桦褐孔菌研究进展 |
| 1.1.1 桦褐孔菌简介 |
| 1.1.2 桦褐孔菌的化学成分 |
| 1.1.3 桦褐孔菌的药理活性 |
| 1.2 桦褐孔菌多糖研究进展 |
| 1.2.1 桦褐孔菌多糖的提取方法 |
| 1.3 多糖抗肿瘤研究进展 |
| 1.3.1 免疫调节作用 |
| 1.3.2 对肿瘤细胞周期的影响 |
| 1.3.3 诱导肿瘤细胞凋亡 |
| 1.3.4 对乳腺癌的治疗作用 |
| 1.4 乳腺癌免疫浸润研究进展 |
| 1.4.1 T细胞 |
| 1.4.2 巨噬细胞 |
| 1.4.3 树突状细胞 |
| 1.4.4 自然杀伤细胞 |
| 1.4.5 纤维母细胞 |
| 1.5 本研究的目的、意义及主要内容 |
| 1.5.1 研究的目的意义 |
| 1.5.2 研究的主要内容 |
| 第二章 桦褐孔菌多糖提取及对乳腺癌细胞的抑制研究 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 原料预处理 |
| 2.2.2 桦褐孔菌多糖的提取流程 |
| 2.2.3 多糖粗提物的初步纯化 |
| 2.2.4 桦褐孔菌多糖的分离 |
| 2.2.5 细胞培养和传代 |
| 2.2.6 细胞冻存和复苏 |
| 2.2.7 MTT实验检测桦褐孔菌多糖对乳腺癌细胞的抑制 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 桦褐孔菌的多糖的提取纯化和分离 |
| 2.3.2 桦褐孔菌多糖对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231 的抑制作用 |
| 2.3.3 桦褐孔菌多糖对鼠乳腺癌细胞株4T-1 的抑制作用 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 乳腺导管及小叶癌免疫相关特征及免疫浸润分析的探讨 |
| 3.1 方法和材料 |
| 3.1.1 数据采集与处理 |
| 3.1.2 乳腺癌TAIG危险评分的构建 |
| 3.1.3 TAIG的评估及其与临床变量的关系 |
| 3.1.4 TAIG与免疫浸润关系的探讨 |
| 3.1.5 两个TAIG组免疫细胞的融合和分化丰度 |
| 3.1.6 统计分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 乳腺癌预后免疫相关信号的识别 |
| 3.2.2 TAIG风险评分与模型评估的建立 |
| 3.2.3 TAIG与肿瘤浸润免疫细胞的关系 |
| 3.2.4 两组肿瘤浸润免疫细胞的差异丰度 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 本章小节 |
| 第四章 基于转录组学考察桦褐孔菌多糖对乳腺癌小鼠免疫浸润相关基因的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 试验设备与耗材 |
| 4.1.4 试验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 桦褐孔菌多糖IOP-5 对小鼠乳腺肿瘤生长的影响 |
| 4.2.2 桦褐孔菌多糖IOP-5 对乳腺癌模型小鼠体重的影响 |
| 4.2.3 桦褐孔菌多糖IOP-5 对乳腺癌模型小鼠瘤体重量的影响 |
| 4.2.4 桦褐孔菌多糖IOP-5 给药前后乳腺癌模型小鼠癌旁组织mRNA-seq表达的差异 |
| 4.2.5 桦褐孔菌多糖IOP-5 给药前后乳腺癌模型小鼠癌旁组织免疫相关基因的功能 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 桦褐孔菌多糖IOP-5对小鼠体内乳腺肿瘤免疫浸润调控机制的研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验材料与试剂 |
| 5.1.2 仪器和耗材 |
| 5.1.3 试验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 桦褐孔菌多糖IOP-5 对乳腺癌肿瘤内NFKBI的影响 |
| 5.2.2 桦褐孔菌多糖IOP-5 对乳腺癌肿瘤内FLT3 的影响 |
| 5.2.3 桦褐孔菌多糖IOP-5 对乳腺癌肿瘤内ADRB1 的影响 |
| 5.2.4 桦褐孔菌多糖IOP-5 对乳腺癌肿瘤内Spib的影响 |
| 5.2.5 桦褐孔菌多糖IOP-5 对乳腺癌肿瘤内Ifne的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 结论,创新点与展望 |
| 6.1 全文结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 |
（5）粒毛盘菌多糖抗肿瘤作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 真菌多糖的提取 |
| 1.2 真菌多糖的纯化 |
| 1.3 真菌多糖的分级分离 |
| 1.4 真菌多糖的纯度及分子量的测定 |
| 1.5 真菌多糖的生物活性 |
| 1.6 粒毛盘菌多糖研究概况 |
| 1.7 本课题研究的内容与意义 |
| 第二章 粒毛盘菌YM130胞外多糖联合5-氟尿嘧啶体外抗肝癌作用及其机制 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 主要试剂和仪器 |
| 2.2.3 细胞培养 |
| 2.2.4 细胞毒性实验 |
| 2.2.5 细胞形态学观察 |
| 2.2.6 克隆形成实验 |
| 2.2.7 伤口愈合实验 |
| 2.2.8 细胞侵袭与迁移实验 |
| 2.2.9 细胞核形态学分析 |
| 2.2.10 Western blot分析以及核蛋白和胞质蛋白提取方法 |
| 2.2.11 细胞凋亡检测 |
| 2.2.12 细胞中活性氧的检测 |
| 2.2.13 细胞周期分析 |
| 2.2.14 细胞线粒体膜电位测定 |
| 2.2.15 细胞免疫荧光染色 |
| 2.2.16 数据统计与分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 5-FU和LEP130分别对Hep G2、LO2和HSF细胞活力的影响 |
| 2.3.2 5-FU与LEP130联用对Hep G2细胞的协同抑制作用 |
| 2.3.3 5-FU与LEP130联用对Hep G2细胞凋亡的影响 |
| 2.3.4 LEP130细胞存活途径的影响 |
| 2.3.5 LEP130对细胞内活性和抗氧化酶的影响 |
| 2.3.6 LEP130对线粒体凋亡途径的影响 |
| 2.3.7 5-FU与LEP130联用对Hep G2细胞周期的影响 |
| 2.3.8 5-FU与LEP130对p53活化状态和DNA修复的影响 |
| 2.3.9 5-FU与LEP130联用Hep G2细胞迁移与侵袭 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 粒毛盘菌YM130胞外多糖联合环磷酰胺体内抗肝癌作用及其机制 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 主要试剂和仪器 |
| 3.2.3 细胞培养 |
| 3.2.4 H22荷瘤小鼠模型 |
| 3.2.5 动物分组与处理 |
| 3.2.6 生化指标分析 |
| 3.2.7 组织病理学检测 |
| 3.2.8 免疫组化检测 |
| 3.2.9 Western blot分析 |
| 3.2.10 TUNEL染色 |
| 3.2.11 线粒体膜电位检测 |
| 3.2.12 数据统计与分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 CTX与LEP130联用对H22 荷瘤小鼠肿瘤生长的影响 |
| 3.3.2 CTX与LEP130联用对H22 荷瘤小鼠肿瘤组织形态的影响 |
| 3.3.3 CTX与LEP130联用对肿瘤细胞死亡受体途径的影响 |
| 3.3.4 CTX与LEP130联用对肿瘤细胞线粒体凋亡途径的影响 |
| 3.3.5 CTX与LEP130联用对H22 荷瘤小鼠免疫系统的影响 |
| 3.3.6 CTX与LEP130联用对肿瘤组织中免疫细胞和免疫因子的影响 |
| 3.3.7 CTX与LEP130联用对肿瘤组织中存活蛋白的影响 |
| 3.3.8 CTX与LEP130联用对肿瘤组织中血管生成的影响 |
| 3.3.9 LEP130对CTX引起的副作用的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 粒毛盘菌YM130胞外多糖通过增强机体免疫系统抑制S180荷瘤小鼠肿瘤生长 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 主要试剂和仪器 |
| 4.2.3 细胞培养 |
| 4.2.4 细胞毒性实验 |
| 4.2.5 S180荷瘤小鼠模型 |
| 4.2.6 动物分组与处理 |
| 4.2.7 生化指标分析 |
| 4.2.8 组织病理学检测 |
| 4.2.9 免疫组化检测 |
| 4.2.10 Western blot分析 |
| 4.2.11 免疫荧光双染实验 |
| 4.2.12 Quantitative real-time PCR(q PCR)检测 |
| 4.2.13 小鼠腹腔巨噬细胞(M?)的制备及条件培养基处理 |
| 4.2.14 数据统计与分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 LEP130对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响 |
| 4.3.2 LEP130对肿瘤微环境中M1、M2型巨噬细胞的影响 |
| 4.3.3 LEP130通过T细胞调节肿瘤微环境中的M1、M2型巨噬细胞的比率 |
| 4.3.4 LEP130对肿瘤特异性辅助性T细胞(Th1)免疫应答的影响 |
| 4.3.5 LEP130对免疫抑制性肿瘤微环境的影响 |
| 4.3.6 LEP130在体外通过TLR4模式识别受体促进原代巨噬细胞向M1 型极化 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 粒毛盘菌YM130胞外多糖抗结肠癌活性与肠道微生物及其代谢物相关性 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 材料 |
| 5.2.2 主要试剂和仪器 |
| 5.2.3 CRC小鼠建模与处理 |
| 5.2.4 生化指标分析 |
| 5.2.5 组织病理学检测 |
| 5.2.6 免疫组化检测 |
| 5.2.7 Western blot分析 |
| 5.2.8 粪便中短链脂肪酸的测定 |
| 5.2.9 DNA提取和16S r RNA测序 |
| 5.2.10 测序数据的处理与生物信息学分析 |
| 5.2.11 非靶向代谢组学检测 |
| 5.2.12 代谢组学数据分析 |
| 5.2.13 数据统计与分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 LEP130对AOM/DSS诱导的小鼠结肠癌发生的影响 |
| 5.3.2 LEP130对结肠癌小鼠肠屏障完整性和肠道炎症的影响 |
| 5.3.3 LEP130对结肠癌小鼠肠道菌群整体结构的影响 |
| 5.3.4 LEP130对结肠癌小鼠肠道菌群组成的影响 |
| 5.3.5 LEP130对结肠癌小鼠肠道菌群相关性的影响 |
| 5.3.6 LEP130对结肠癌小鼠代谢组的影响 |
| 5.3.7 LEP130对结肠癌小鼠差异代谢物与肠道菌群相关性的影响 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的学术活动及成果情况 |
（6）肝细胞源性MANF通过调节内质网应激介导的细胞凋亡减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤（论文提纲范文）
| 中英文缩写词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1.引言 |
| 2.材料和方法 |
| 2.1. 实验动物 |
| 2.2. 细胞株、菌株 |
| 2.3. 质粒 |
| 2.4. 抗体 |
| 2.5. 主要试剂 |
| 2.6. 引物 |
| 2.7. 实验仪器设备 |
| 2.8. 常用试剂配方 |
| 3.实验方法 |
| 3.1. 质粒转化 |
| 3.2. 质粒小提 |
| 3.3. 质粒鉴定 |
| 3.4. 质粒大提 |
| 3.5. 细胞免疫荧光 |
| 3.6. 细胞DAB染色 |
| 3.7. MANF~(hep-/-)小鼠鉴定 |
| 3.8. 小鼠缺血再灌注模型建立 |
| 3.9. ALT检测 |
| 3.10. AST检测 |
| 3.11. 肝组织HE染色 |
| 3.12. 免疫组化 |
| 3.13. 肝组织免疫荧光染色 |
| 3.14. TUNEL染色 |
| 3.15. 肝癌细胞株转染 |
| 3.16. 免疫共沉淀 |
| 3.17. 考马斯亮蓝染色 |
| 3.18. 蛋白质质谱分析 |
| 3.19. 免疫印迹 |
| 3.20. RT-PCR |
| 3.21. 原代肝细胞提取 |
| 3.22. 糖氧剥夺实验 |
| 3.23. 统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1. 人肝脏组织存在MANF表达 |
| 4.2. 缺血再灌注损伤诱导小鼠肝细胞MANF表达 |
| 4.3. 肝细胞敲除MANF对小鼠缺血再灌注损伤的影响 |
| 4.4. 肝细胞敲除MANF加重了缺血再灌注损伤导致的内质网应激 |
| 4.5. rhMANF蛋白可以通过缓解内质网应激从而减轻缺血再灌注所诱导的凋亡 |
| 4.6. MANF通过JNK/c-JUN/CHOP通路调控小鼠肝脏缺血再灌注损伤 |
| 4.7. MANF与GRP75直接相互作用并影响其生物活性 |
| 5.讨论 |
| 5.1. 缺血再灌注损伤诱导MANF的表达上调 |
| 5.2. 肝细胞敲除MANF加重缺血再灌注损伤 |
| 5.3. MANF影响缺血再灌注诱导的凋亡 |
| 5.4. 内质网应激与凋亡 |
| 5.5. 内质网应激与MANF |
| 5.6. MANF蛋白的治疗作用 |
| 5.7. JNK/c-Jun/CHOP信号通路的激活 |
| 5.8. MANF与GRP75、BIP的结合 |
| 6.结论 |
| 参考文献 |
| 附录 个人简历 |
| 致谢 |
| 综述 UPR和MAPK对机体应激反应的影响 |
| 参考文献 |
（7）基于聚（β-氨基酯）的智能纳米载体的构建及其用于肿瘤联合治疗的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、具有pH/氧化还原双重响应的聚氨基酯纳米共载体系联合基因治疗与化疗治疗肝癌的体外研究 |
| 1.1 对象与方法 |
| 1.1.1 实验所用细胞系 |
| 1.1.2 实验材料 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 两步法制备ssPBAE |
| 1.1.5 琼脂糖凝胶电泳实验考察ssPBAE氧化还原响应特性 |
| 1.1.6 胺基化的含二硫键的聚(β-氨基酯)(NH-ssPBAE)的制备与表征 |
| 1.1.7 ssPBAE-MTX的制备、表征及载药量测定 |
| 1.1.8 ssPBAE-MTX/pDNA纳米复合物的制备及表征 |
| 1.1.9 CAPL/ssPBAE-MTX/pDNA与CAPL/ssPBAE-MTX/TAMRA-DNA纳米共载体系的制备及表征 |
| 1.1.10 药物释放实验 |
| 1.1.11 配制灭菌PBS缓冲溶液 |
| 1.1.12 细胞培养 |
| 1.1.13 激光共聚焦实验考察CAPL/ssPBAE-MTX/TAMRA-DNA纳米共载体系与HepG2细胞系的共定位 |
| 1.1.14 考察CAPL/ssPBAE-MTX/TAMRA-DNA纳米共载体系溶酶体逃逸能力 |
| 1.1.15 CCK-8细胞毒性实验 |
| 1.1.16 统计学分析 |
| 1.2 实验结果 |
| 1.2.1 DSEA与ssPBAE的合成路线及表征 |
| 1.2.2 琼脂糖凝胶电泳实验考察ssPBAE氧化还原响应特性 |
| 1.2.3 ssPBAE-MTX的制备与表征 |
| 1.2.4 ssPBAE-MTX/pDNA纳米复合物的制备及表征 |
| 1.2.5 CAPL/ssPBAE-MTX/pDNA纳米共载体系的制备及表征 |
| 1.2.6 CAPL/ssPBAE-MTX/pDNA纳米共载体系的药物释放特性 |
| 1.2.7 细胞摄取实验 |
| 1.2.8 溶酶体逃逸实验 |
| 1.2.9 CCK-8细胞毒性实验 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 智能响应性阳离子聚合物ssPBAE的合成 |
| 1.3.2 CAPL/ssPBAE-MTX/pDNA纳米共载体系的电荷翻转能力 |
| 1.3.3 细胞摄取实验 |
| 1.3.4 溶酶体逃逸机制 |
| 1.3.5 CCK-8细胞毒性实验 |
| 1.4 小结 |
| 二、具有pH/氧化还原双重响应的聚氨基酯纳米共载体系通过联合COX-2抑制剂与化疗逆转乳腺癌耐药的研究 |
| 2.1 对象与方法 |
| 2.1.1 实验所用细胞系 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 实验材料 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.1.5 ssPBAE/PLGA纳米载体的制备及表征 |
| 2.1.6 PPDC纳米核的制备及表征 |
| 2.1.7 HPPDC纳米共载体系的制备及表征 |
| 2.1.8 药物释放实验 |
| 2.1.9 TEM考察HPPDC纳米共载体系降解后的形貌特征 |
| 2.1.10 配制灭菌PBS缓冲溶液 |
| 2.1.11 细胞培养 |
| 2.1.12 激光共聚焦实验考察HPPDC纳米共载体系与细胞的共定位 |
| 2.1.13 流式实验考察细胞系对HPPDC纳米共载体系的摄取 |
| 2.1.14 CCK-8细胞毒性实验 |
| 2.1.15 细胞凋亡实验 |
| 2.1.16 RT-PCR考察细胞水平mRNA表达 |
| 2.1.17 Western blot考察细胞水平蛋白表达 |
| 2.1.18 考察HPPDC/Cy5.5纳米共载体系在BALB/c荷瘤裸鼠体内的靶向性 |
| 2.1.19 考察HPPDC纳米共载体系体内抗肿瘤效果 |
| 2.1.20 H&E染色考察组织病理学变化 |
| 2.1.21 TUNEL染色 |
| 2.1.22 RT-PCR考察小鼠肿瘤组织mRNA表达 |
| 2.1.23 Western blot考察小鼠肿瘤组织蛋白表达 |
| 2.1.24 统计学分析 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 考察ssPBAE与PLGA的最佳复合比 |
| 2.2.2 PPDC的表征及体外稳定性 |
| 2.2.3 HPPDC纳米共载体系的制备及体外稳定性考察 |
| 2.2.4 考察PPDC纳米核与HPPDC纳米共载体系中DOX与CXB的载药量与包封率 |
| 2.2.5 药物释放实验 |
| 2.2.6 TEM考察HPPDC纳米共载体系降解后的形貌变化 |
| 2.2.7 细胞摄取实验 |
| 2.2.8 CCK-8细胞毒性实验 |
| 2.2.9 细胞凋亡实验 |
| 2.2.10 RT-PCR和Western实验考察细胞水平mRNA与蛋白表达 |
| 2.2.11 小鼠活体成像实验 |
| 2.2.12 考察HPPDC纳米共载体系体内抗肿瘤效果 |
| 2.2.13 H&E染色 |
| 2.2.14 TUNEL染色 |
| 2.2.15 评价动物水平耐药机制 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 HPPDC纳米共载体系的制备及表征 |
| 2.3.2 HPPDC纳米共载体系的载药量以及包封率 |
| 2.3.3 HPPDC纳米共载体系的pH/氧化还原响应性药物释放能力 |
| 2.3.4 细胞摄取实验 |
| 2.3.5 RT-PCR和 Western blot考察细胞水平耐药机制 |
| 2.3.6 小动物活体成像实验 |
| 2.3.7 评价HPPDC纳米共载体系体内抗肿瘤效果 |
| 2.3.8 H&E染色 |
| 2.3.9 TUNEL染色 |
| 2.3.10 评价其动物水平耐药机制 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 纳米粒子用于克服肿瘤多药耐药的相关研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）夏枯草提取物中熊果酸抑制甲状腺乳头状癌细胞TPC-1增殖的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 夏枯草提取物中UA对TPC-1细胞增殖的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验受试样品 |
| 1.2 实验细胞 |
| 1.3 实验试剂与仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 夏枯草水、乙醇、乙酸乙酯提取物对TPC-1细胞增殖的影响 |
| 2.1.1 夏枯草水提取物的制备 |
| 2.1.2 夏枯草乙醇提取物的制备 |
| 2.1.3 夏枯草乙酸乙酯提取物的制备 |
| 2.1.4 夏枯草水、乙醇、乙酸乙酯提取物溶液的配制 |
| 2.1.5 溶媒对照 |
| 2.1.6 方法 |
| 2.2 夏枯草乙酸乙酯提取物中UA、OA、CA、MA、BA的含量测定 |
| 2.2.1 对照品溶液的制备 |
| 2.2.2 供试品溶液的制备 |
| 2.2.3 色谱条件 |
| 2.3 夏枯草提取物中UA的提取及含量测定 |
| 2.3.1 夏枯草中UA的提取 |
| 2.3.2 提取物UA对照品溶液的制备 |
| 2.3.3 供试品溶液的制备 |
| 2.4 夏枯草提取物中UA对 TPC-1、Nthy-ori3-1 细胞增殖的影响 |
| 2.4.1 夏枯草提取物中UA的配制 |
| 2.4.2 溶媒对照 |
| 2.4.3 方法 |
| 2.5 试剂配制 |
| 2.5.1 完全培养基(含10%胎牛血清) |
| 2.5.2 细胞冻存液 |
| 2.5.3 MTT溶液 |
| 2.6 细胞的培养 |
| 2.6.1 细胞培养 |
| 2.6.2 细胞传代 |
| 2.6.3 细胞冻存 |
| 2.6.4 细胞复苏 |
| 2.7 结果计算及分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 夏枯草水、乙醇、乙酸乙酯提取物对TPC-1细胞增殖的影响 |
| 3.2 夏枯草乙酸乙酯提取物中UA、OA、CA、MA、BA的含量测定 |
| 3.3 夏枯草提取物中UA的提取及含量测定 |
| 3.3.1 提取夏枯草果穗收集得到UA化合物纯度较纯,结构谱图见图4、5、6 |
| 3.3.2 提取夏枯草收集得到UA化合物纯度相关图谱,见图7、8、9、10 |
| 3.3.3 UA、夏枯草供试品溶液的高效液相色谱(HPLC)图谱分别见图11、12 |
| 3.3.4 线性关系考察 |
| 3.4 夏枯草提取物中UA对 TPC-1 细胞和Nthy-ori3-1 细胞增殖的影响 |
| 4 小结 |
| 第二部分 夏枯草提取物中UA作用PTC的 RNA测序分析 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 受试样品 |
| 1.2 细胞株 |
| 1.3 主要试剂与药品 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 试剂配制 |
| 2.1.1 10%胎牛血清完全培养基 |
| 2.1.2 细胞冻存液 |
| 2.1.3 琼脂糖凝胶 |
| 2.1.4 75%、90%乙醇 |
| 2.2 细胞的培养 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 细胞传代 |
| 2.2.3 细胞冻存 |
| 2.2.4 细胞复苏 |
| 2.3 夏枯草提取物中UA作用PTC的 RNA测序分析 |
| 2.3.1 细胞分组 |
| 2.3.2 RNA的提取、质量检测、文库建立、上机测序、结果分析 |
| 2.4 QRT-PCR验证富集通路p53/MAPK通路有基因的表达水平 |
| 2.4.1 细胞总RNA的提取 |
| 2.4.2 检测RNA纯度及定量 |
| 2.4.3 逆转录合成cDNA |
| 2.4.4 QRT-PCR上机检测 |
| 2.4.5 结果处理 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 夏枯草提取物中UA作用PTC的 RNA测序分析 |
| 4.1.1 样本检测与质控 |
| 4.1.2 质控分析 |
| 4.1.3 定量 |
| 4.1.4 差异分析 |
| 4.1.5 GO、KEGG富集分析 |
| 4.2 QRT-PCR验证富集通路p53/MAPK信号通路上相关基因的表达水平 |
| 4.2.1 RNA完整性鉴定 |
| 4.2.2 QRT-PCR扩增曲线 |
| 4.2.3 QRT-PCR产物熔解曲线 |
| 4.2.4 夏枯草提取物中UA对 TPC-1 细胞p53/MAPK通路上相关基因mRNA表达水平的影响 |
| 5 小结 |
| 第三部分 夏枯草提取物UA对TPC-1的作用及机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 受试样品 |
| 1.2 细胞株 |
| 1.3 主要试剂与药品 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 试剂配制 |
| 2.1.1 10%SDS溶液 |
| 2.1.2 10%过硫酸铵溶液 |
| 2.1.3 10×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 |
| 2.1.4 转移缓冲液 |
| 2.1.5 1 0×TBS |
| 2.1.6 TBST |
| 2.1.7 封闭液 |
| 2.1.8 UA配制 |
| 2.1.9 PMSF溶液 |
| 2.1.10 RIPA裂解液的配制 |
| 2.2 细胞的培养 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 细胞传代 |
| 2.2.3 细胞冻存 |
| 2.2.4 细胞复苏 |
| 2.3 夏枯草提取物中UA对TPC-1细胞凋亡的影响 |
| 2.3.1 UA和溶媒对照的配制 |
| 2.3.2 实验方法 |
| 2.4 夏枯草提取物中UA对TPC-1细胞生长周期的影响 |
| 2.4.1 UA和溶媒对照的配制 |
| 2.4.2 实验方法 |
| 2.5 夏枯草提取物UA对 TPC-1 细胞中p53/MAPK信号通路的影响 |
| 2.5.1 UA和溶媒对照的配制 |
| 2.5.2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 夏枯草提取物中UA对TPC-1细胞凋亡的影响 |
| 3.2 夏枯草提取物中UA对TPC-1细胞生长周期的影响 |
| 3.3 夏枯草提取物UA对 TPC-1 细胞中p53/MAPK通路相关蛋白的影响 |
| 3.3.1 UA对 TPC-1 细胞中p53 蛋白表达的影响 |
| 3.3.2 UA对 TPC-1 细胞中TSHR蛋白表达的影响 |
| 3.3.3 UA对 TPC-1 细胞中c-Myc蛋白表达的影响 |
| 3.3.4 UA对 TPC-1 细胞中BRAF蛋白表达的影响 |
| 3.3.5 UA对 TPC-1 细胞中PKACa蛋白表达的影响 |
| 3.3.6 UA对 TPC-1 细胞中PAK4 蛋白表达的影响 |
| 3.3.7 UA对 TPC-1 细胞中P-PAK4 蛋白表达的影响 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 夏枯草提取物的药理作用和研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（9）δ-生育三烯酚抗炎抗癌的生理功能及其分子机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写注解 |
| 1 引言 |
| 1.1 米糠油成分 |
| 1.2 米糠油的提取与纯化 |
| 1.2.1 直接压榨法 |
| 1.2.2 溶剂提取法 |
| 1.2.3 水酶辅助提取法 |
| 1.2.4 微波辅助提取法 |
| 1.2.5 超声波辅助提取法 |
| 1.2.6 CO_2超临界提取法 |
| 1.2.7 亚临界丙烷辅助提取法 |
| 1.2.8 其他提取方法 |
| 1.3 米糠油的生理活性功能 |
| 1.3.1 米糠中的γ-谷维素的生理功能 |
| 1.3.2 米糠油中普利醇(高级烷醇)的生理功能 |
| 1.3.3 米糠油中维生素E的生理功能 |
| 1.4 δ-生育三烯酚的生理功能 |
| 1.4.1 δ-生育三烯酚的降血脂的功能 |
| 1.4.2 δ-生育三烯酚的抗癌作用 |
| 1.4.3 δ-生育三烯酚的抗炎功能 |
| 1.4.4 δ-生育三烯酚缓解心脏病和动脉硬化的作用 |
| 1.4.5 δ-生育三烯酚对骨质增生的作用 |
| 1.4.6 δ-生育三烯酚对神经性退行疾病的影响 |
| 1.4.7 小结 |
| 2 δ-生育三烯酚的提取与检测 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 实验器材 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 米糠油中的维生素E成分 |
| 2.3.2 米糠油的纯化和富集 |
| 2.4 讨论 |
| 3 δ-生育三烯酚抗炎作用及其分子机理研究 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验器材及用品 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 δ-生育三烯酚对巨噬细胞的毒性 |
| 3.3.2 δ-生育三烯酚对巨噬细胞炎症因子mRNA表达的影响 |
| 3.3.3 δ-生育三烯酚对巨噬细胞炎症因子蛋白表达水平的影响 |
| 3.3.4 δ-生育三烯酚对巨噬细胞NF-κB和 AP-1 核移位的影响 |
| 3.3.5 δ-生育三烯酚对巨噬细胞AP-1/NF-κB转录活性的影响 |
| 3.3.6 δ-生育三烯酚对巨噬细胞MAPK磷酸化的影响 |
| 3.3.7 δ-生育三烯酚对LPS诱导的巨噬细胞PPARs活化的影响 |
| 3.3.8 阻断MAPK通路对巨噬细胞PPAR活性的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 4 δ-生育三烯酚抑制鼻咽癌细胞CNE1的增殖 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验器材 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.0 MTS筛选δ-生育三烯酚处理最敏感的癌细胞类型 |
| 4.3.1 MTS分析δ-生育三烯酚对鼻咽癌细胞增殖的影响 |
| 4.3.2 δ-生育三烯酚对鼻咽癌细胞CNE1细胞周期的影响 |
| 4.3.3 δ-生育三烯酚对CNE1细胞CDKI mRNA表达水平的影响 |
| 4.3.4 δ-生育三烯酚对CNE1细胞Cyclin表达和CDK活性的影响 |
| 4.3.5 δ-生育三烯酚对CNE1细胞AP-1和NF-κB转录活性的影响 |
| 4.3.6 δ-生育三烯酚对CNE1细胞MAPK通路的影响 |
| 4.3.7 基因芯片系统检测δ-生育三烯酚调控的靶基因 |
| 4.3.8 基因芯片数据的IPA分析 |
| 4.4 讨论 |
| 5 δ-生育三烯酚对CNE1细胞凋亡的作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验试剂 |
| 5.2.2 实验器材 |
| 5.2.3 实验方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 δ-生育三烯酚诱导鼻咽癌细胞CNE1凋亡 |
| 5.3.2 δ-生育三烯酚促使鼻咽癌细胞Caspase活化 |
| 5.3.3 δ-生育三烯酚影响鼻咽癌细胞Bax和 Bcl-2 的表达 |
| 5.4 讨论 |
| 6 结论与创新点 |
| 6.1 主要研究结论 |
| 6.2 论文创新性 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间科研成果 |
（10）夏枯草提取物的药理作用和研究进展（论文提纲范文）
| 1 抗肿瘤作用 |
| 1.1 肝癌 |
| 1.2 肺癌 |
| 1.3 人结肠癌 |
| 1.4 甲状腺癌和乳腺癌 |
| 1.4.1 甲状腺癌 |
| 1.4.2 乳腺癌 |
| 2 免疫调节作用 |
| 3 抗炎、抗氧化 |
| 3.1 抗炎 |
| 3.2 抗氧化 |
| 4 抗菌、抗病毒 |
| 4.1 抗菌 |
| 4.2 抗病毒 |
| 5 小结 |
四、γ-干扰素对肝癌细胞株Hep-G2 Fas、Bcl-2表达的影响（论文参考文献）
- [1]“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究[D]. 刘皎皎. 湖北中医药大学, 2021
- [2]阿克替苷通过p38MAPK信号通路对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用[D]. 魏敏. 兰州大学, 2021(12)
- [3]中药单体及复方对肝癌细胞中NF-κB相关信号通路的作用机制[J]. 夏弋钦,修丽梅,郭利华. 西部中医药, 2021(01)
- [4]桦褐孔菌多糖抑制乳腺癌的免疫浸润的机制的研究[D]. 张博川. 沈阳农业大学, 2020(08)
- [5]粒毛盘菌多糖抗肿瘤作用及其机制研究[D]. 宗帅. 合肥工业大学, 2020(01)
- [6]肝细胞源性MANF通过调节内质网应激介导的细胞凋亡减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤[D]. 杨懿. 安徽医科大学, 2020(04)
- [7]基于聚（β-氨基酯）的智能纳米载体的构建及其用于肿瘤联合治疗的研究[D]. 张思培. 天津医科大学, 2020(06)
- [8]夏枯草提取物中熊果酸抑制甲状腺乳头状癌细胞TPC-1增殖的实验研究[D]. 向润清. 云南中医药大学, 2020(01)
- [9]δ-生育三烯酚抗炎抗癌的生理功能及其分子机理研究[D]. 沈珺珺. 中南林业科技大学, 2020(05)
- [10]夏枯草提取物的药理作用和研究进展[J]. 向润清,张艳娇,黄宽,林艾和,陈玉,高雪娟,张芳,范源. 中国民族民间医药, 2020(08)